文献情報
文献番号
201132030A
報告書区分
総括
研究課題名
遺伝子組換え医薬品等のプリオン安全性確保のための検出法及びプリオン除去工程評価に関する研究
課題番号
H22-医薬・一般-006
研究年度
平成23(2011)年度
研究代表者(所属機関)
山口 照英(国立医薬品食品衛生研究所 生物薬品部)
研究分担者(所属機関)
- 橋井 則貴(国立医薬品食品衛生研究所 生物薬品部)
- 生田 和良(大阪大学 微生物病研究所)
- 萩原 克郎(酪農学園大学 獣医学部)
- 菊池 裕(国立医薬品食品衛生研究所 衛生微生物部)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 健康安全確保総合研究 医薬品・医療機器等レギュラトリーサイエンス総合研究
研究開始年度
平成22(2010)年度
研究終了予定年度
平成23(2011)年度
研究費
5,300,000円
研究者交替、所属機関変更
-
研究報告書(概要版)
研究目的
遺伝子組換え医薬品等の製造における異常プリオン (PrPSc) 除去/不活能評価法の開発及び標準化を目指して,医薬品原材料や製造中間工程製品等におけるPrPScの特異的検出法, PrPScの除去能評価法及びin vivo 評価手法の確立の確立を行うと共に,プリオン病早期診断法への応用も行う.
研究方法
微量の酸性糖鎖付加糖タンパク質の効率的回収法の検討,微量糖タンパク質の効率的回収法の検討,ウエスタンブロット (WB) によるPrPSc 除去能力評価方法及び除去デバイスの最適化,プリオン発症モデルの検討,並びにプリオンペプチド抗原を特異的に認識する抗体の調製について検討した.
結果と考察
1)微量プリオンタンパク質の精製及び解析に応用可能な電気泳動ゲルからの微量糖タンパク質及び糖鎖の回収法の最適化を行った.
2)マウス馴化vCJD (mo-vCJD) 感染マウス脳由来PrPScを用いて,WB法による高感度PrPSc 除去能力評価方法を確立した.
3)mo-vCJD感染マウス脳由来PrPScを用いて,リン酸緩衝液組成でのプリオン吸着担体の探索を行い,PrPScの除去に有効な新規デバイスを見いだした.
4)生後1日齢と30日齢マウスにそれぞれmo-vCJD株を接種し臨床所見を比較した結果,発症までの期間が生後1日齢マウスよりも30日齢マウスで早かった.PrP除去効果を評価する動物試験では,実験手技の簡便性,実験期間,組織病変所見等を考慮すると30日齢マウスへの接種が感染マウスモデルとして適当であると考えられる.
5)43番目のSerをリン酸化したプリオンペプチド抗原でマウスを免疫することにより, PrPScを特異的に認識する抗体を調製し,イムノブロット法によりその有用性を評価した.今後は,感染初期でのPrPSc検出法確立等への利用を試み,プリオン病早期診断法への応用可能性を検討する.
2)マウス馴化vCJD (mo-vCJD) 感染マウス脳由来PrPScを用いて,WB法による高感度PrPSc 除去能力評価方法を確立した.
3)mo-vCJD感染マウス脳由来PrPScを用いて,リン酸緩衝液組成でのプリオン吸着担体の探索を行い,PrPScの除去に有効な新規デバイスを見いだした.
4)生後1日齢と30日齢マウスにそれぞれmo-vCJD株を接種し臨床所見を比較した結果,発症までの期間が生後1日齢マウスよりも30日齢マウスで早かった.PrP除去効果を評価する動物試験では,実験手技の簡便性,実験期間,組織病変所見等を考慮すると30日齢マウスへの接種が感染マウスモデルとして適当であると考えられる.
5)43番目のSerをリン酸化したプリオンペプチド抗原でマウスを免疫することにより, PrPScを特異的に認識する抗体を調製し,イムノブロット法によりその有用性を評価した.今後は,感染初期でのPrPSc検出法確立等への利用を試み,プリオン病早期診断法への応用可能性を検討する.
結論
今年度の成果は,製造工程における高感度及び高異性PrPSc検出法の開発,PrPSc除去/不活能評価法の標準化に向けた有用な結果が得られた。またこれらの成果はプリオン病早期診断法の開発にもつながることが期待される.
公開日・更新日
公開日
2015-06-29
更新日
-