ヒト型抗ＳＡＲＳ中和抗体の開発研究 | 厚生労働科学研究成果データベース

文献情報

文献番号

200400602A

報告書区分

総括

研究課題名

ヒト型抗ＳＡＲＳ中和抗体の開発研究

課題番号

研究年度

平成16(2004)年度

研究代表者(所属機関)

切替　照雄(国立国際医療センター研究所　感染・熱帯病研究部)

研究分担者(所属機関)

笹月　健彦(国立国際医療センター)
田代　眞人(国立感染症研究所　ウイルス第３部)
七條　茂樹(久留米大学医学部　免疫学教室)
石田　功(キリンビール株式会社医薬カンパニー医薬フロンティア研究所)

研究区分

厚生労働科学研究費補助金疾病・障害対策研究分野新興・再興感染症研究

研究開始年度

平成16(2004)年度

研究終了予定年度

平成18(2006)年度

研究費

15,000,000円

研究者交替、所属機関変更

研究報告書（概要版）

研究目的

本研究では、SARSウイルス感染予防、感染後の発症予防、発症後の重症化予防と治療法確立を目的とし、ヒト型ウシを用いたヒト型中和抗体の開発を目指す。SARS患者血清と反応する多数のSARSウイルス抗原エピトープを同定し、これらエピトープを含むオリゴペプチドをヒト型マウス及びウシに免疫し、大量のヒト型中和抗体を作成し実用化を目指す。

研究方法

抗原ペプチドの候補選定：SARSウイルス構成タンパク由来の15merペプチドを合計197種類合成し、color-coded beadsに共有結合させ、これらペプチドに対する抗体は、Luminexを用いたflowmetryで行った。
抗原ペプチドのデザイン：SARS患者に特異的なペプチドの配列を元にペプチドを合成した。
組換え蛋白質の調整：His-Tagが除去可能な設計とするため、前者ではTEVプロテアーゼというエンドプロテアーゼの認識部位をHis-Tag直下に導入した。大腸菌での大量発現の確認後、ニッケルキレートカラム、His-Tag除去、TEVプロテアーゼにより精製した。
抗体中和活性試験の確立：Vero E6細胞系をヒト型抗体の中和試験に対して最適化を行なった。

結果と考察

抗原ペプチドの候補選定：SARS-CoV由来Ｓ、Ｍ及びＮ蛋白質の３つの蛋白質情報から197種類の重なり合うように設計されたペプチドを合成し、感染後のSARS患者44名から採取した血清中のIgGとの反応性を検証して、抗原ペプチド候補を絞りこんだ。
抗原ペプチドの設計：SARS患者に特異的な３つのペプチドの配列を元にペプチドを合成した。これらの配列にMAP修飾したもの、インフルエンザ血球凝集素ペプチドまたはユビキチン卵白アルブミンペプチドとこれらの配列を融合させたものの、総計4種類のデザインを行った。
組換え蛋白質の調整：SARS-CoV由来蛋白質のうち抗原候補として、Ｓ、Ｍ及びＮ蛋白質の組換え蛋白質、抗原を調整した。
抗体中和活性試験の確立：Vero E6細胞の細胞変性を指標としたヒト型抗体の中和試験を確立してプロトコールを作成した。

結論

SARSウイルスの感染防御、感染後のSARS発症予防、さらにSARS発症後の重症化予防と治療を目指した。本年度は、抗原ペプチドの候補選定、抗原ペプチドのデザイン、組換え蛋白質の調整、抗体中和活性試験の確立の３項目を実施し、大きな進展があった。