文献情報
文献番号
201920018A
報告書区分
総括
研究課題名
抗原検出キットを用いたアメーバ赤痢の診断法に関する研究
課題番号
H30-エイズ-一般-010
研究年度
令和1(2019)年度
研究代表者(所属機関)
渡辺 恒二(国立研究開発法人国立国際医療研究センター エイズ治療・研究開発センター )
研究分担者(所属機関)
- 古賀 道子(東京大学 医科学研究所先端医療研究センター 感染症分野)
- 中田 浩智(熊本大学病院 感染免疫診療部)
- 八木田 健司(国立感染症研究所 寄生動物部)
- 小林 泰一郎(がん・感染症センター 東京都立駒込病院 感染症科)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 疾病・障害対策研究分野 エイズ対策政策研究
研究開始年度
平成30(2018)年度
研究終了予定年度
令和1(2019)年度
研究費
12,463,000円
研究者交替、所属機関変更
該当なし
研究報告書（概要版）
研究目的
アメーバ赤痢は、Entamoeba histolyticaによって引き起こされる腸管寄生虫症であり、5類全数把握疾患に指定されている。発生件数は、2000年に378件であったが2016年には1151件と急増している。さらに、診断の遅れは致死的となることが知られており、確定診断例だけでも死亡例が最近10年間 (2008-2017) に38件報告いるが、死亡例の多くは剖検で診断されており、死亡症例数は過小評価されている可能性が高い。アメーバ赤痢は、国内では性感染症として拡大しており、特に HIV感染者では大きな問題となっている。一方、これまで国内の保険診療で認可され、年間数千件の検査（2017年実績）があった「血清赤痢アメーバ抗体」検査が、2017年末に検査不可となり、国内で認可されている診断的検査は、「鏡検法（Entamoeba の形態的同定）」のみとなった。今後、病原体診断は益々困難となり、重症致死例が増加することが懸念される。本研究では、アメーバ赤痢を臨床現場で確実に診断できる診療体制を構築するために、日本での診療体制におけるイムノクロマトグラフィ法によるアメーバ抗原診断の有用性を検証する。
研究方法
研究体制
HIV感染者の診療を行っている全国の5施設で、2018年10月から2019年12月末までの1年強の研究期間で研究を行った。検査項目は、保険診療内で行われた直接検鏡検査に加えて、イムノクロマトグラフィキットによる E. histolytica 抗原検出法 (抗原検出検査) と核酸増幅検査 (PCR) を行い、それらの結果を集計して解析した。PCR は、これまで臨床検体に対する全国からの E. histolytica 診断を引き受けてきた実績のある分担研究者 (感染症研究所寄生動物部八木田) により実施された。
データ解析
研究デザインは、多施設による横断研究である。
解析対象となるデータは、直接検鏡検査（Entamoeba の形態的な同定）、 抗原検出検査 （E. HISTOLYTICA QUIK CHEK カード式キットの検査結果）、 E. histolytica 特異的プライマーを用いた 定性PCR である。
解析方法は、 PCR の結果を Reference データとし、PCR 陽性検体を赤痢アメーバ症確定例、PCR 陰性検体を非赤痢アメーバ症症例と定義した。直接検鏡検査と抗原検出検査の結果を PCR による reference データと比較し、各々の検査の検査感度と特異度を算出した。
HIV感染者の診療を行っている全国の5施設で、2018年10月から2019年12月末までの1年強の研究期間で研究を行った。検査項目は、保険診療内で行われた直接検鏡検査に加えて、イムノクロマトグラフィキットによる E. histolytica 抗原検出法 (抗原検出検査) と核酸増幅検査 (PCR) を行い、それらの結果を集計して解析した。PCR は、これまで臨床検体に対する全国からの E. histolytica 診断を引き受けてきた実績のある分担研究者 (感染症研究所寄生動物部八木田) により実施された。
データ解析
研究デザインは、多施設による横断研究である。
解析対象となるデータは、直接検鏡検査（Entamoeba の形態的な同定）、 抗原検出検査 （E. HISTOLYTICA QUIK CHEK カード式キットの検査結果）、 E. histolytica 特異的プライマーを用いた 定性PCR である。
解析方法は、 PCR の結果を Reference データとし、PCR 陽性検体を赤痢アメーバ症確定例、PCR 陰性検体を非赤痢アメーバ症症例と定義した。直接検鏡検査と抗原検出検査の結果を PCR による reference データと比較し、各々の検査の検査感度と特異度を算出した。
結果と考察
全国のHIV診療拠点病院で原虫感染疑いと診断された糞便検体を用いて、既存のアメーバ赤痢診断方法である糞便直接検鏡法と海外で標準的に用いられている E. histolytica 抗原検出法を行った。また、 E. histolytica 感染の確認検査として、国立感染症研究所寄生動物部で遺伝子検査 (PCR法) を行い、糞便直接検鏡法と E. histolytica 抗原検出法の感度と特異度を解析した。最終的に、 657件の便検体の解析を行い、PCR 法により 40件で E. histolytica の感染が確定された。これら、 40 件の陽性検体と 617 件の陰性検体をコントロールとして、検鏡検査と E. histolytica 抗原検出法の感度・特異度を算出したところ、検鏡検査は感度62.5%, 特異度99.8%であり、抗原検出法は感度 45.0%, 特異度 100% であった。また、抗原検出法は、検鏡でシスト型 E. histolytica を認める場合や固形便で、栄養型 E. histolytica を含む場合や下痢便と比較して、著しく感度が低下することが示された。一方で、定量 PCR で病原体の核酸量と抗原検査の結果との間には、相関がみられなかった。以上より、 E. histolytica 抗原検出法は、栄養型 E. histolytica を認めるような腸炎症例に対しては、非常に有用性の高い検査である一方、シスト型 E. histolytica を認めるようなキャリア症例に対しては、感度が落ちるということが明らかになった。
結論
検査者の技術や場所に依らず、迅速かつ安定した精度で、侵襲性のアメーバ性腸炎 (栄養型 Entamoeba 排出) を診断できる、抗原検出検査の有用性は極めて高い。一方で、無症候性持続感染者や肝膿瘍発症患者に対しては、検鏡検査や血清抗体検査などの検査を併用して診断する必要があり、赤痢アメーバ症の診断体制に関して、更なる整備が必要であると考えられた。
公開日・更新日
公開日
2021-06-01
更新日
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