文献情報
文献番号
201324115A
報告書区分
総括
研究課題名
間葉性異形成胎盤の臨床的・分子遺伝学的診断法の開発を目指した基盤研究
課題番号
H24-難治等(難)-一般-077
研究年度
平成25(2013)年度
研究代表者(所属機関)
副島 英伸(国立大学法人佐賀大学 医学部分子生命学講座)
研究分担者(所属機関)
- 片渕 秀隆(国立大学法人熊本大学大学院生命科学研究部・産科婦人科学)
- 大場 隆(国立大学法人熊本大学大学院生命科学研究部・産科婦人科学)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 疾病・障害対策研究分野 難治性疾患等克服研究(難治性疾患克服研究)
研究開始年度
平成24(2012)年度
研究終了予定年度
平成25(2013)年度
研究費
4,985,000円
研究者交替、所属機関変更
-
研究報告書(概要版)
研究目的
間葉性異形成胎盤(Placental mesenchymal dysplasia:PMD)は、胞状奇胎と類似した嚢胞状変化を呈するが、組織学的にはトロホブラストの異常増殖を認めない胎盤形態異常である。分娩例の0.02%とまれな病態とされてきたが、国内外での報告が急増している。部分胞状奇胎や胎児共存奇胎との鑑別を要し、誤診されると無用の人工流産を招く。また高率に早産、胎児発育不全(FGR)、胎児死亡(IUFD)を合併し、現時点でIUFDを予知する方法はない。本研究では、病理組織学的に診断された症例を収集し、レトロスペクティブに臨床情報を解析することで、臨床診断基準を確立し、病態を解明すること、および原因遺伝子を同定し遺伝子診断の基盤開発を行うことを目的とした。
研究方法
1.症例の集積
協力医療機関での症例、論文発表あるいは関連学会で報告された症例を収集した。
2.臨床情報解析
妊娠経過、胎児発育経過、および新生児経過等を経時的に解析した。
3.病理学的解析
母性発現インプリント遺伝子p57KIP2 (KIP2)の免疫組織化学染色を行うとともに、個々の胎盤におけるPMD病変の組織学的分布を精査した。
4.エピゲノム解析
凍結PMD検体5例と正常胎盤7例を用いて、HumanMethylation450 BeadChip (Illumina社)でDNAメチル化解析(ゲノム中の47万ヵ所のCpGのメチル化を解析)を行った。
5.全ゲノム多型解析
全染色体に分布する4塩基反復配列マーカーあるいはGenome-Wide Human SNP array 6.0(Affymetrix社)を用いて全ゲノム解析を行った。一部の症例では、インプリント遺伝子KIP2とPHLDA2の遺伝子発現量を解析した。
協力医療機関での症例、論文発表あるいは関連学会で報告された症例を収集した。
2.臨床情報解析
妊娠経過、胎児発育経過、および新生児経過等を経時的に解析した。
3.病理学的解析
母性発現インプリント遺伝子p57KIP2 (KIP2)の免疫組織化学染色を行うとともに、個々の胎盤におけるPMD病変の組織学的分布を精査した。
4.エピゲノム解析
凍結PMD検体5例と正常胎盤7例を用いて、HumanMethylation450 BeadChip (Illumina社)でDNAメチル化解析(ゲノム中の47万ヵ所のCpGのメチル化を解析)を行った。
5.全ゲノム多型解析
全染色体に分布する4塩基反復配列マーカーあるいはGenome-Wide Human SNP array 6.0(Affymetrix社)を用いて全ゲノム解析を行った。一部の症例では、インプリント遺伝子KIP2とPHLDA2の遺伝子発現量を解析した。
結果と考察
1.症例収集ならびに臨床情報解析
合計症例数は41例となった。今年度収集した10例中6例が女児であり、生殖補助医療を受けた症例は1例(タイミング法)であった。1例が妊娠16週で人工流産を選択していた。妊娠を継続した9例のうち1例が妊娠20週で子宮内胎児死亡に至り、2例がFGRを呈した。生児を得た8例のうち6例が低出生体重児であった。また、3例に新生児DIC、1例に肝腫大および低血糖、1例に低アルブミン血症および胸腹水、1例に肝過誤腫が認められた。2例はBWSと診断された。胎盤重量は分娩週数に関わらず正常胎盤重量と比較して大きい傾向にあった。胎盤重量(胎盤/胎児重量比)が大きいことは、分娩週数、出生時体重、BWSの合併と相関していなかった。
2.病理学的解析
2名の病理専門医により病理組織学的に再評価し、PMDの診断を確定し得た16例についてPMD病変の分布を検討した。13例では、複数の箇所から採取された検体全てにPMDと診断し得る領域が認められるとともに、正常胎盤の構築が様々な割合で混在していた。残る3例においてはPMDの所見が認められず、正常胎盤と評価される標本があった。PMDではKIP2の発現が絨毛内間質や血管を構築する細胞で消失すると報告されている。正常胎盤の構築を示す領域ではKIP2の発現も正常であったが、PMDの構築を示す領域では、KIP2が正常発現を示す部位と発現消失を示す部位が混在していた。KIP2の発現消失は、PMD診断の十分条件ではあるが必要条件ではないことが示唆された。
3.エピゲノム解析
PMDで高メチル化を示す遺伝子2個と低メチル化を示す遺伝子を5個同定した。しかし、胎盤におけるメチル化は、妊娠週数による違い、個体差による違い、同一胎盤内での部位による違いが存在することから、これらの遺伝子については詳細且つ慎重に解析する必要がある。
4.全ゲノムSNP解析
解析できた22例中20例に11p15領域の父性片親性ダイソミー(patUPD)のモザイクを認め、17例がisodisomyで3例がheterodisomyであった。また、SNP arrayで解析した6例は、androgenetic/biparentalモザイク(モザイク率:10%程度~60%程度)であった。一方、22例中2例はpatUPDを認めず、このうち1例ではインプリント遺伝子の発現を制御するKvDMR1領域の低メチル化を認めた。さらに、KvDMR1によって制御されるインプリント遺伝子KIP2とPHLDA2の遺伝子発現を定量リアルタイムRT-PCRで解析したところ、遺伝子発現量が低下していた。ゲノム・インプリンティング異常がPMD発症に関与している可能性が示唆された。
合計症例数は41例となった。今年度収集した10例中6例が女児であり、生殖補助医療を受けた症例は1例(タイミング法)であった。1例が妊娠16週で人工流産を選択していた。妊娠を継続した9例のうち1例が妊娠20週で子宮内胎児死亡に至り、2例がFGRを呈した。生児を得た8例のうち6例が低出生体重児であった。また、3例に新生児DIC、1例に肝腫大および低血糖、1例に低アルブミン血症および胸腹水、1例に肝過誤腫が認められた。2例はBWSと診断された。胎盤重量は分娩週数に関わらず正常胎盤重量と比較して大きい傾向にあった。胎盤重量(胎盤/胎児重量比)が大きいことは、分娩週数、出生時体重、BWSの合併と相関していなかった。
2.病理学的解析
2名の病理専門医により病理組織学的に再評価し、PMDの診断を確定し得た16例についてPMD病変の分布を検討した。13例では、複数の箇所から採取された検体全てにPMDと診断し得る領域が認められるとともに、正常胎盤の構築が様々な割合で混在していた。残る3例においてはPMDの所見が認められず、正常胎盤と評価される標本があった。PMDではKIP2の発現が絨毛内間質や血管を構築する細胞で消失すると報告されている。正常胎盤の構築を示す領域ではKIP2の発現も正常であったが、PMDの構築を示す領域では、KIP2が正常発現を示す部位と発現消失を示す部位が混在していた。KIP2の発現消失は、PMD診断の十分条件ではあるが必要条件ではないことが示唆された。
3.エピゲノム解析
PMDで高メチル化を示す遺伝子2個と低メチル化を示す遺伝子を5個同定した。しかし、胎盤におけるメチル化は、妊娠週数による違い、個体差による違い、同一胎盤内での部位による違いが存在することから、これらの遺伝子については詳細且つ慎重に解析する必要がある。
4.全ゲノムSNP解析
解析できた22例中20例に11p15領域の父性片親性ダイソミー(patUPD)のモザイクを認め、17例がisodisomyで3例がheterodisomyであった。また、SNP arrayで解析した6例は、androgenetic/biparentalモザイク(モザイク率:10%程度~60%程度)であった。一方、22例中2例はpatUPDを認めず、このうち1例ではインプリント遺伝子の発現を制御するKvDMR1領域の低メチル化を認めた。さらに、KvDMR1によって制御されるインプリント遺伝子KIP2とPHLDA2の遺伝子発現を定量リアルタイムRT-PCRで解析したところ、遺伝子発現量が低下していた。ゲノム・インプリンティング異常がPMD発症に関与している可能性が示唆された。
結論
本邦PMD症例に関する臨床的・遺伝学的特徴を見出すことができた。更なる症例を集積し、臨床情報解析および遺伝子解析を進めることで遺伝子診断も含めた診断基準確立や診療ガイドラインを策定することが肝要と思われる。
公開日・更新日
公開日
2015-06-30
更新日
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