文献情報
文献番号
201318021A
報告書区分
総括
研究課題名
プロウイルスゲノム破壊による革新的ＨＴＬＶ－１関連疾患発症遅延法の開発
課題番号
H23-新興-一般-028
研究年度
平成25(2013)年度
研究代表者(所属機関)
駒野 淳(大阪府立公衆衛生研究所 感染症部ウイルス課)
研究分担者(所属機関)
- 岡田 誠治(熊本大学 エイズ学研究センター  )
- 星野 忠次(千葉大学 大学院薬学研究院  )
- 竹腰 正隆(東海大学 医学部)
- 武田 哲(国立感染症研究所 エイズ研究センター )
- 田中 淳(大阪大学 微生物病研究所)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 疾病・障害対策研究分野 新型インフルエンザ等新興・再興感染症研究
研究開始年度
平成23(2011)年度
研究終了予定年度
平成25(2013)年度
研究費
7,567,000円
研究者交替、所属機関変更
-
研究報告書（概要版）
研究目的
HTLV-1感染症対策には感染者におけるHTLV-1関連疾患の発症遅延法の開発が必要である。治療より発症防止の方が感染者の身体的負担は小さいうえ、社会経済的観点からもメリットがある。ウイルスゲノムを不可逆的に不活化する方法があれば確実に発症遅延が達成できると期待できる。我々はZinc Finger Nuclease(ZFN)技術を応用してウイルスを不可逆的に不活化する方法を開発する。
研究方法
治療分子機能評価に関しては、LTR機能を測定する評価系、プロウイルス除去能の評価系、HTLV-1感染細胞の細胞増殖阻害評価系にてZFNの生物活性を検証した。また、免疫不全マウスにZFNを導入したATL細胞株EDをxenograftingし、腫瘍細胞の生着と増殖を測定することによりZFNの持つATL治療活性をin vivoで評価した。治療分子送達法の開発においては、HTLV-1感染標的であるCD4陽性細胞に特異的分子送達するベクター構築に向けて、ベクター被覆に供する健常人由来のCD4反応性抗体FabクローンHO538-213を抗体工学的にscFvに改変し、抗原反応特異性とエピトープの同定、細胞膜表面発現型誘導体の作出を行った。
結果と考察
世界で始めてHTLV-1プロウイルスを物理的に傷害する機能を有するHTLV-1関連疾患の治療分子開発に成功した。これはZFNを基盤とする分子で、HTLV-1のLTRを特異的に認識してDSBを導入する。治療分子がHTLV-1感染細胞を殺傷する活性とプロウイルスを除去する活性を併せ持つ事を証明した。さらにマウスにおけるATL腫瘍モデルにおいてin vivo治療効果を有する事も明らかにした。治療分子を実用化するためには安全な治療分子デリバリー法の構築に関して、健常人に由来するCD4反応性モノクローナル抗体HO538-213を基盤にレトロ・レンチウイルスベクターで治療分子をHTLV-1の感染標的であるCD4陽性T細胞に効率よく送達する系の構築を試みた。抗体の認識エピトープを明らかにし、抗体が極めて安全性の高い分子である確証を得た。抗体工学によりHO538-213 FabをscFv化し、さらにGPIアンカー型scFvを作出し、これが細胞膜表面にあることを確認した。さらにCD4認識抗体の抗原親和性を向上することにも成功した。
結論
ZFN技術は既に臨床応用で一定の成果を挙げており、安全性に関するハードルが低く、迅速な実用化が期待できる。プロウイルス除去やLTR不可逆的破壊が可能であることが証明され、HTLV-1感染者へ次世代医療の提供を前提とした新たな厚生研究の方向性を示す事ができた。また、根治療法の実用化を念頭においたHTLV-1病理学的基礎研究の方向性の提示にも貢献できた。本研究によって長期間にわたる医療機関への受診や薬剤の長期投与を感染者に要求せずに発症を食い止める「感染者にやさしい発症予防法」の確立が期待される。波及効果として、治療分子送達技術や抗体工学は、HTLV-1感染症領域を超えて遺伝子治療や抗体医薬の領域にも多大な貢献が期待できる。
公開日・更新日
公開日
2015-03-31
更新日
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