バイオ人工細胞・臓器の開発による糖尿病その他の疾患の治療

文献情報

• 文献番号: 201126034A
• 報告書区分: 総括
• 研究課題名: バイオ人工細胞・臓器の開発による糖尿病その他の疾患の治療
• 課題番号: H23-免疫・一般-012
• 研究年度: 平成23(2011)年度
• 研究代表者(所属機関): 宮川 周士(大阪大学 医学系研究科)

研究分担者(所属機関)

• 長嶋　比呂志(明治大学農学部生命科学科発生工学研究室)
• 岡部　勝(大阪大学遺伝情報実験センター)

• 研究区分: 厚生労働科学研究費補助金 疾病・障害対策研究分野 免疫アレルギー疾患等予防・治療研究
• 研究開始年度: 平成23(2011)年度
• 研究終了予定年度: 平成25(2013)年度
• 研究費: 9,060,000円
• 研究者交替、所属機関変更: -

研究報告書（概要版）

研究目的

医療用バイオ人工細胞・臓器の開発。主眼をバイオ人工膵島とし、細胞供給用の遺伝子改変ブタの作出をめざす。

研究方法

1.遺伝子構築
　C1-INH+Thrombomodulin+DAF+MCPcyt(-)<CTDM>をinsuline promoter、HLA-Ev(147)+IRES+humanβ-2 microglobulin(hβ2m)＜HLA-E*＞をpCAGGSに組み込んだ。
　 cDNAのcodonを改変しブタで至適なものとした。　
　*　DAFの機能ドメインSCR2-4。同じく、MCPのSCR2-4。C1-INHの1-99aaを除去。ThrombomodulineはEGF4-6とEGF3の一部。＜CTDM＞
　* HLA-Ev(147)(147aaのSをCに変更)にIRESでhuman β2m。＜HLA-E*＞
　* CMAHのsiRNA法によるknock out(KD)。
　* H-1 promoterにpol部分のsiRNAの組み込み。U6 promoterも用意。
2.In vitroでの確認　ブタの細胞で検定。
3.Transgenicブタ作り
　顕微授精(ICSI-mediated gene transfer)法を用いて、ブタの体外成熟卵に遺伝子導入を行い、発生への影響を調べた。

結果と考察

1.作製遺伝子構築
pCAGGS/CTDM, pCPI(pig insulin promoter)/CTDM,pCAGGS/ HLA-E*,H1/siRNA-pCMAH,H1/siRNA-PERV
2.細胞での発現
　ブタの血管内皮細胞に遺伝子導入し、FACSで発現を確認。
3.ブタでの発現
　 CTDMおよびHLA-E*遺伝子をそれぞれ約40個の卵に導入した結果、18.4%および35.9%の胚盤胞形成率が得られた。HLA-E*遺伝子導入の発生阻害はないと判断。
HLA-E*遺伝子導入胚97個を2頭のレシピエント雌に移植した。妊娠診断は未実施。
顕微授精法の応用による、HLA-E*、CTDM遺伝子-ブタの作出は十分可能とし、CTDM遺伝子を再精製し、発生阻害性を検討する予定。

結論

現時点で遺伝子構築が終わり、それぞれICSI法でブタに遺伝子導入し、in vivoでの発現を検討中。顕微授精法によるブタ体外成熟卵へのHLA-E*遺伝子の導入は、発生を阻害せず、胎仔を得ることが可能であると考えられた。

公開日・更新日

• 公開日: 2012-06-07
• 更新日: -

収支報告書

• 文献番号: 201126034Z