自然免疫細胞リモデリングによるウイルス性肝炎の新規治療法の開発

文献情報

文献番号

201030035A

報告書区分

総括

研究課題名

自然免疫細胞リモデリングによるウイルス性肝炎の新規治療法の開発

研究課題名（英字）

-

課題番号

H22-肝炎・一般-009

研究年度

平成22(2010)年度

研究代表者(所属機関)

大段　秀樹(広島大学　大学院医歯薬学総合研究科)

研究分担者(所属機関)

茶山　一彰(広島大学　大学院医歯薬学総合研究科)
田原　栄俊(広島大学　大学院医歯薬学総合研究科)
田中　純子(広島大学　大学院医歯薬学総合研究科)
立野　知世（向谷知世）(株式会社フェニックスバイオ)
伊藤　敬(長崎大学　医歯薬学総合研究科)
渕本　康史(慶應義塾大学　医学部)

研究区分

厚生労働科学研究費補助金疾病・障害対策研究分野肝炎等克服緊急対策研究

研究開始年度

平成22(2010)年度

研究終了予定年度

平成24(2012)年度

研究費

28,600,000円

研究者交替、所属機関変更

-

研究報告書（概要版）

研究目的

肝癌/Ｃ型肝炎合併肝硬変は、肝移植の高頻度な適応疾患であるが、移植後免疫抑制により再発の危険性が助長される。我々は肝由来natural killer (NK)/NKT細胞を用いた抗癌/抗Ｃ型肝炎ウイルス(HCV)免疫細胞療法を臨床導入した。本研究は、免疫細胞療法の治療効率を改善するため、末梢血CD56+細胞や造血幹細胞、iPS細胞からNK/NKT細胞を誘導する方法を開発し、このリモデリング自然細胞を用いた新規治療法を確立する。平成22年度は、成熟CD56+ NK/NKT細胞の増殖法を開発し、また末梢血CD34+幹細胞からNK/NKT細胞の分化法を開発し、それぞれのHCV複製抑制効果を解析した。

研究方法

末梢血CD56+細胞の増殖法に有効な培養系を検討した。末梢血単核球を、各種培養液、添加因子を用い培養後、細胞増殖率、フェノタイプ、IFN-γ産生能、抗HCV効果を解析した。さらに、u-PA Transgenic/SCIDマウスに、ヒト肝細胞を移植して作製したHCV感染ヒト肝細胞キメラマウスにリモデリング細胞を移入した。また、末梢血あるいは肝由来CD34+造血幹細胞からのNK/NKT細胞への分化/誘導法を開発し、抗HCV効果を検討した。

結果と考察

IL-2/抗CD3抗体を加えた自己血清添加のX-VIVOメディウムが、最も効率よく末梢血CD56+細胞を増殖可能で、HepG2に対してTRAILを介した強い細胞傷害性を示した。また、増殖CD56+細胞は、IFN-γに依存した強い抗HCV効果を示した。28日培養増殖したCD56+細胞をHCV感染ヒト肝細胞キメラマウスに60 x106個/日、５日間移入するとHCVが消失した。
末梢血および肝由来単核球からCD34＋細胞を分離し、適切なタイミングで4種類のサイトカイン（Flt3-L, SCF, IL-15, IL-7）を添加培養後、NK細胞を分化誘導した。18日間の培養により約100倍に増殖し、約60%がCD56＋細胞に分化した。分化増殖したCD56＋細胞は、HCVレプリコン細胞に対し有意なウイルス増幅抑制効果を示した。

結論

末梢血CD56+細胞からNK/NKT細胞を培養増殖し、HCV肝炎感染ヒト肝細胞キメラマウスを用いHCV複製抑制効果を確認できた。末梢血CD34+幹細胞からNK細胞の誘導法を確立し、in vitroでのHCV複製抑制効果の誘導に成功した。