難治性眼炎症性疾患に対する網羅的迅速診断システムの開発

文献情報

文献番号

201027039A

報告書区分

総括

研究課題名

難治性眼炎症性疾患に対する網羅的迅速診断システムの開発

課題番号

H21-感覚・一般-005

研究年度

平成22(2010)年度

研究代表者(所属機関)

望月　學(東京医科歯科大学　医歯学総合研究科)

研究分担者(所属機関)

森尾　友宏(東京医科歯科大学　医歯学総合研究科)
清水　則夫(東京医科歯科大学　医歯学総合研究科)
杉田　直(東京医科歯科大学　医歯学総合研究科)
臼井　嘉彦(東京医科大学　医学部)
大黒　伸行(大阪大学　医学部)
竹内　大(防衛医科大学　医学部)
園田　康平(九州大学　医学部)
丸山　和一(京都府立医科大学　医学部)
宮田　和典(明和会宮田眼科病院)

研究区分

厚生労働科学研究費補助金疾病・障害対策研究分野障害者対策総合研究

研究開始年度

平成21(2009)年度

研究終了予定年度

平成23(2011)年度

研究費

7,000,000円

研究者交替、所属機関変更

-

研究報告書（概要版）

研究目的

細菌Broad-range PCRの眼科分野での有効性を検証する目的で、感染性眼内炎の主要な起炎菌を検出できるか、およびPCR検出感度について検討した。

研究方法

起炎菌の検出：細菌性眼内炎の起炎菌として、頻度の高い16種類の細菌よりDNA抽出し、DNA濃度を1?10ng/mｌに調整したのち細菌16S rRNA Broad‐range　 real-time PCR を施行した。
PCR検出感度：E.coli およびS.aureusの 106 CFU/PCR?100 CFU/PCR溶液、コントロールとして3倍希釈の硝子体液よりDNAを抽出し、real-time PCRを施行した。
（倫理面への配慮）
　本研究はヘルシンキ宣言の趣旨を尊重し、学内倫理委員会の承認のもと患者のインフォード・コンセントを得た上で施行した。

結果と考察

起炎菌の検出：グラム陽性菌11種類およびグラム陰性菌5種類の計16種類を検査した。その結果PCRに用いたDNA濃度は1.4?8.7ng/mlで、Ct値は全て30以下、Ct値より算出したDNAコピー数は103?105copies/mlであった。またコントロールに用いた滅菌水のコピー数は10以下であった。（図１）
PCR検出感度：大腸菌の検出感度は100CFU/PCR、黄色ブドウ球菌の検出感度は101CFU/PCRで良好な感度であった。

結論

今回使用したPCRは主要な眼内炎起炎菌を検出し、その感度は良好であった。