文献情報
文献番号
201824004A
報告書区分
総括
研究課題名
輸血用血液製剤と血漿分画製剤の安全性確保と安定供給のための新興・再興感染症の研究
課題番号
H29-医薬-一般-002
研究年度
平成30(2018)年度
研究代表者(所属機関)
岡田 義昭(埼玉医科大学 医学部)
研究分担者(所属機関)
- 沢辺 京子(国立感染症研究所・昆虫医科学部・部長)
- 平 力造(日本赤十字社・血液事業本部・安全管理課長)
- 林 昌宏(国立感染症研究所・ウイルス第一部・室長)
- 大隈 和(国立感染症研究所・血液・安全性研究部・室長)
- 前野 英毅(一般社団法人日本血液製剤機構・中央研究所・室長)
- 下池 貴志(国立感染症研究所・ウイルス第二部・主任研究官)
- 野島 清子(国立感染症研究所・血液・安全性研究部・主任研究官)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 健康安全確保総合研究分野 医薬品・医療機器等レギュラトリーサイエンス政策研究
研究開始年度
平成29(2017)年度
研究終了予定年度
令和1(2019)年度
研究費
7,770,000円
研究者交替、所属機関変更
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研究報告書（概要版）
研究目的
ヒトや物資の国際的な移動の急速な増加や地球温暖化のためにデング熱やジカ熱などの蚊媒介ウイルス感染症が東南アジアや中南米諸国で流行し、毎年輸入感染例が報告されている。また、E型肝炎ウイルスに加えて重症熱性血小板減少症やダニ媒介脳炎などダニ媒介のウイルス感染症も広く国内に存在していることも明らかになっている。これらの病原体は、いずれもウイルス血症を起こすことから血液製剤を介して感染する可能性がある。一方、血液製剤の安全性評価の対象となるC型肝炎ウイルス（HCV）は、未だ特殊な株以外に培養系がなく、不活化法の評価には動物由来のモデルウイルスが使用されている。本研究班では、これらの病原体を検出する検査法の開発と標準化、スクリーニング法の開発、血液製剤の新しい不活化法の開発、さらにHCVやE型肝炎ウイルス(HEV)の効率良い培養系の開発を実施し、血液製剤の安全性の向上と安定供給を目指す。
研究方法
蚊媒介性ウイルスのウイルス学的特性の解析では、デングウイルス、ウエストナイルウイルスを含むフラビウイルス共通プライマーを用いた迅速診断法のデング患者検体に対する反応性を検討した。重症熱性血小板減少症候群ウイルスの検出法確立に関する研究では、SFTSVのデータベースを基に大規模スクリーニング用のプライマーとプローブのセットをデザイン・作製し、リアルタイムRT-PCR（SYBR及びTaqMan）によりスクリーニングした。新興感染症発生時の献血対応に関する研究では、蚊媒介ウイルス感染症への対策のため各ウイルスについて疫学、症状、感染経路、輸血感染、海外措置及び国内の対応についてリスク分析を行った。赤血球製剤の病原体不活化法の開発では、仮性狂犬病ウイルスを添加しヘマトクリット40％に調整した赤血球製剤を深さ４mmになるようにプレート添加した。「Pheophorbide a」は、最終濃度20μg/mLと30μg/mLになるように加え、10～30分間赤色光（20000ルクス）を照射した。また、E型肝炎ウイルスの不活化に関する研究では、リバースジェネティクス法を用いて高濃度Ｅ型肝炎ウイルス（HEV）を作成し、ウイルス除去膜による除去効率を血漿由来のHEVと比較検討した。血液製剤を介するダニ媒介感染症の予防の研究では、渡り鳥の飛来地でのマダニからウイルスの検出を行なった。また、マダニの吸血動物の嗜好性を解析するReverse Line Blot（RLB）法の改良を行った。C型肝炎ウイルスの不活化の研究では、野生株を用いたin vitro培養系を確立するために宿主蛋白質Sec14L2やmiR122を発現させ、感染成立の有無を解析した。また、実ウイルスを用いたエタノール分画法によるHCVの不活化•除去の評価では、HCV抗体の影響を評価するためHCV抗体陽性血漿からグロブリンを精製した。
結果と考察
フラビウイルス共通プライマーを用いた迅速診断法のデング患者検体に対する反応性を検討したところ、デング1型から4型までの検体中のウイルス遺伝子を検出することを確認した。また本共通プライマーはアフリカ型の遺伝子型であるジカウイルスMR766株も検出することを確認した。SFTSの検出法の開発では、大規模スクリーニング用のプライマー350セットからスクリーニングによって増幅効率が最良のプライマー・プローブを2セット選定デザインした。新興感染症発生時の対応ではリスク評価を基に対応手引（案）を作成した。さらに風疹、麻疹等のウイルス検出系を立ち上げその評価を実施した。赤血球製剤の病原体不活化法の開発では、「Pheophorbide a」を30μg/mL添加し、赤色光の照射によって仮性狂犬病ウイルスは検出感度以下にまで不活化できた。E型肝炎ウイルスの不活化では、リバースジェネティクス法で得られた高力価のHEVは感染者血漿由来のウイルスと同等にウイルス除去膜では除去された。ダニ媒介感染症の予防の研究では、渡り鳥飛来地で採取したマダニから数種のウイルスが検出され、鳥に付着したダニに感染地域が拡大する可能性が示唆された。また、RLB法の改良を行い、吸血動物を幅広く同定できるようになった。エタノール分画法による解析では、精製したグロブリン間でHCVの感染抑制活性の違いが明らかとなった。
結論
これら成果は血液製剤の安全性確保と安定供給のために大いに役立つと考えられる。
公開日・更新日
公開日
2019-07-03
更新日
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