文献情報
文献番号
201823002A
報告書区分
総括
研究課題名
食品中残留農薬等の分析法に関する研究
課題番号
H28-食品-一般-002
研究年度
平成30(2018)年度
研究代表者(所属機関)
根本 了(国立医薬品食品衛生研究所 食品部第一室)
研究分担者(所属機関)
- 坂井 隆敏(国立医薬品食品衛生研究所 食品部第一室)
- 志田 静夏（齊藤 静夏）(国立医薬品食品衛生研究所 食品部第一室)
- 菊地 博之(国立医薬品食品衛生研究所 食品部第一室)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 健康安全確保総合研究分野 食品の安全確保推進研究
研究開始年度
平成28(2016)年度
研究終了予定年度
平成30(2018)年度
研究費
10,000,000円
研究者交替、所属機関変更
-
研究報告書（概要版）
研究目的
食品中に残留する農薬等の分析法開発に資する以下の5課題について実施する。30年度は課題2、課題4及び課題5について実施した。
課題1：欧米等における残留農薬等の公定試験法の開発手法の調査（28～29年度実施）
欧米等の残留農薬等の分析法開発の方針及び評価基準等について調査し、技術的な観点から、日本の試験法開発への適用の必要性などについてまとめる。
課題2：食品中アミノグリコシド系抗生物質分析法の開発
極めて極性が高いため分析が困難なアミノグリコシド系抗生物質の畜水産物を対象とした、簡易・迅速、高精度かつ高感度な分析法を開発する。
課題3：試料調製方法の検討（28年度実施）
試料量を減らす事により分析時間の短縮が期待できる事から、試料量と分析値のばらつきの関係を求め、精確な分析値を得るのに必要な最小試料量を明らかにする事を目的とした。
課題4：スクリーニング分析法のガイドライン策定のための基礎的検討（29～30年度実施）
スクリーニング分析法のガイドラインを作成するため、海外のガイドラインについて調査するとともに、偽陰性・偽陽性が少ないスクリーニング分析法とするための要件について分析データを基に明らかにし、スクリーニング分析法の性能評価方法及び性能基準を確立する。
課題5：抗生物質の系統的分析法に関する評価研究
食品中の残留抗生物質の試験は、バイオアッセイ法からLC-MS/MS法等の機器分析への移行が進んでいるが、低コストで簡便であるなどの理由から、バイオアッセイ法が現在も汎用されている。そこで、バイオアッセイ法及びLC-MS/MS法の特性を踏まえ、効率的かつ国際的な整合性を考慮した抗生物質の試験体系・試験法を提案する。
課題1：欧米等における残留農薬等の公定試験法の開発手法の調査（28～29年度実施）
欧米等の残留農薬等の分析法開発の方針及び評価基準等について調査し、技術的な観点から、日本の試験法開発への適用の必要性などについてまとめる。
課題2：食品中アミノグリコシド系抗生物質分析法の開発
極めて極性が高いため分析が困難なアミノグリコシド系抗生物質の畜水産物を対象とした、簡易・迅速、高精度かつ高感度な分析法を開発する。
課題3：試料調製方法の検討（28年度実施）
試料量を減らす事により分析時間の短縮が期待できる事から、試料量と分析値のばらつきの関係を求め、精確な分析値を得るのに必要な最小試料量を明らかにする事を目的とした。
課題4：スクリーニング分析法のガイドライン策定のための基礎的検討（29～30年度実施）
スクリーニング分析法のガイドラインを作成するため、海外のガイドラインについて調査するとともに、偽陰性・偽陽性が少ないスクリーニング分析法とするための要件について分析データを基に明らかにし、スクリーニング分析法の性能評価方法及び性能基準を確立する。
課題5：抗生物質の系統的分析法に関する評価研究
食品中の残留抗生物質の試験は、バイオアッセイ法からLC-MS/MS法等の機器分析への移行が進んでいるが、低コストで簡便であるなどの理由から、バイオアッセイ法が現在も汎用されている。そこで、バイオアッセイ法及びLC-MS/MS法の特性を踏まえ、効率的かつ国際的な整合性を考慮した抗生物質の試験体系・試験法を提案する。
研究方法
課題2：カートリッジカラムを用いた精製方法を改良した後、これまでに検討した抽出法と精製法を組み合わせて分析法を構築し、畜産物を用いた添加回収試験により構築した分析法の適用性を評価した。
課題4：EUの残留動物用医薬品のスクリーニング分析法の性能評価に関するガイドラインCRLs 2010を参考に、スクリーニング分析の性能評価方法をまとめた。また、27年度に行ったLC-TOF-MSを用いた動物用医薬品一斉分析法の妥当性評価試験データを用いて、策定した性能評価方法への分析データの適用検討を行った。
課題5：簡易検査法の高感度化について、残留基準値を超過する最低濃度の抗生物質を添加した牛の筋肉を検体として、抽出液の濃度及び試験菌を変更して検討した。
課題4：EUの残留動物用医薬品のスクリーニング分析法の性能評価に関するガイドラインCRLs 2010を参考に、スクリーニング分析の性能評価方法をまとめた。また、27年度に行ったLC-TOF-MSを用いた動物用医薬品一斉分析法の妥当性評価試験データを用いて、策定した性能評価方法への分析データの適用検討を行った。
課題5：簡易検査法の高感度化について、残留基準値を超過する最低濃度の抗生物質を添加した牛の筋肉を検体として、抽出液の濃度及び試験菌を変更して検討した。
結果と考察
課題2：ギ酸アンモニウムを添加して2 mol/L塩酸及びメタノール（1：1）混液で抽出し、弱酸性陽イオン交換カートリッジカラムで精製する方法を構築した。構築した分析法を用いて畜産物を対象に添加回収試験を実施した結果、一部の食品と化合物の組み合わせでは良好な真度が得られなかったものの、概ね50%以上の真度が得られ、併行精度は良好であった。
課題4：分析データをCRLs 2010に示されている性能評価方法へ適用して検討し、評価指標に標準溶液に対するピーク面積比を用い、偽陰性率1％未満及び偽陽性率5％未満となるカットオフ値を設定するなどの変更をした上で、スクリーニング分析法の性能評価方法及び性能要件を提案した。
課題5： 2倍濃い抽出液を用いても現行の簡易試験法の検査結果とほぼ同様の結果であった。また、米国の公定法で使用されている試験菌に変更して検討した結果、多くの化合物で阻止円は形成されなかったことから、当該試験菌を用いる際には、培地のpHが結果に大きな影響を与えると考えられた。
課題4：分析データをCRLs 2010に示されている性能評価方法へ適用して検討し、評価指標に標準溶液に対するピーク面積比を用い、偽陰性率1％未満及び偽陽性率5％未満となるカットオフ値を設定するなどの変更をした上で、スクリーニング分析法の性能評価方法及び性能要件を提案した。
課題5： 2倍濃い抽出液を用いても現行の簡易試験法の検査結果とほぼ同様の結果であった。また、米国の公定法で使用されている試験菌に変更して検討した結果、多くの化合物で阻止円は形成されなかったことから、当該試験菌を用いる際には、培地のpHが結果に大きな影響を与えると考えられた。
結論
課題2：構築した分析法は畜産物中のアミノグリコシド系抗生物質のスクリーニング分析法として有用であり、本法の実施により残留が疑われる場合には、精製法を工夫することにより効率的な畜産食品中アミノグリコシド系抗生物質の分析が可能と考えられた。
課題4：CRLs 2010を参考にして、残留濃度が基準値の1/2以上の試料を「陽性」と判定（偽陰性率1％未満及び偽陽性率5％未満）できるように性能評価方法及び性能要件を設定した。本法によって評価した分析法でスクリーニング分析を行い、基準値超過の疑いがある検体のみ、精確に定量可能な分析法で確定試験を行えば、検査の迅速化・効率化を図ることができると考えられた。
課題5：簡易検査法の高感度化について検討（抽出液の濃度、試験菌）したが、良好な結果は得られなかった。簡易検査法の高感度化には、抽出方法、精製方法等を含めて大幅な見直しが必要と考えられた。簡易検査法をスクリーニング検査法として用いる場合には、抗生物質の検出感度等の確認を十分に行った上で、運用すべきであると考えられた。
課題4：CRLs 2010を参考にして、残留濃度が基準値の1/2以上の試料を「陽性」と判定（偽陰性率1％未満及び偽陽性率5％未満）できるように性能評価方法及び性能要件を設定した。本法によって評価した分析法でスクリーニング分析を行い、基準値超過の疑いがある検体のみ、精確に定量可能な分析法で確定試験を行えば、検査の迅速化・効率化を図ることができると考えられた。
課題5：簡易検査法の高感度化について検討（抽出液の濃度、試験菌）したが、良好な結果は得られなかった。簡易検査法の高感度化には、抽出方法、精製方法等を含めて大幅な見直しが必要と考えられた。簡易検査法をスクリーニング検査法として用いる場合には、抗生物質の検出感度等の確認を十分に行った上で、運用すべきであると考えられた。
公開日・更新日
公開日
2019-12-26
更新日
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