糖尿病性腎症の糖鎖プロファイリングによる新規バイオマーカーの同定

文献情報

文献番号
201413003A
報告書区分
総括
研究課題名
糖尿病性腎症の糖鎖プロファイリングによる新規バイオマーカーの同定
課題番号
H24-難治等(腎)-一般-003
研究年度
平成26(2014)年度
研究代表者(所属機関)
和田　淳(国立大学法人岡山大学　大学院医歯薬学総合研究科)
研究分担者(所属機関)
  • 江口　潤(国立大学法人岡山大学　岡山大学病院)
  • 中司　敦子(国立大学法人岡山大学　岡山大学病院)
  • 勅使川原　早苗(国立大学法人岡山大学　大学院医歯薬学総合研究科)
  • 肥田　和之(独立行政法人国立病院機構　岡山医療センター)
  • 清水　一紀(心臓病センター榊原病院)
  • 宮下　雄博(岡山赤十字病院　糖尿病センター　糖尿病・代謝内科)
  • 松岡　孝(倉敷中央病院　糖尿病内科)
  • 安藤　晋一郎(岡山市立市民病院　糖尿病科・糖尿病センター)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 疾病・障害対策研究分野 【補助金】 難治性疾患等克服研究（腎疾患対策研究）
研究開始年度
平成24(2012)年度
研究終了予定年度
平成26(2014)年度
研究費
18,000,000円
研究者交替、所属機関変更
-

研究報告書（概要版）

研究目的
ヒトゲノムの配列が決定され、ポストゲノム研究が注目を集めるなか、糖尿病および糖尿病合併症の発症や進展に糖鎖異常が関与していることが報告されている。これらの糖鎖異常が明らかになれば、予後を推測するバイオマーカーとして有用であるのみならず、その糖鎖異常をターゲットとした治療戦略へと研究が展開する可能性がある。そこで糖尿病性腎症患者尿の糖鎖プロファイルを網羅的に解析した。
研究方法
健常人と糖尿病性腎症患者のセントリコンにより濃縮した尿サンプルをAgilentマルチプルアフィニティ除去システムで6種の主要蛋白を除去した後、透析膜を用いてPBSにバッファー交換した。健常人(n=12)、糖尿病性腎症正常アルブミン尿期(n=7)、微量アルブミン尿期(n=5)、顕性蛋白尿期(n=5)の尿サンプルを用いて、糖尿病性腎症の病期別にレクチンアレイ解析を行った。蛋白質濃度を測定し、Cy3標識したサンプルを濃度調製しGlycostationにより45種のレクチンへの結合性を測定した。腎症病期の進行にしたがって、シグナルが上昇していたのはα2-6結合シアル酸関連レクチン(SNA,SSA,TJA-1)であった。さらにSSAレクチンカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーにより精製したサンプルをLC-MS/MSによるショットガン解析を施行したところ28種類の糖蛋白質を同定した。これらの糖蛋白質のうち8種類がELISA法で測定が可能であり、そのうち測定感度以下とならず安定して測定できたのは、α1-microglobulin, orosomucoid, fetuin-Aであった。平成25年度に血液検査を施行しえた糖尿病患者737名について、年齢・BMI (body mass index)、外来血圧、HbA1c、随時血糖、血清コレステロール、トリグリセリド、HDLコレステロール、LDLコレステロール、血清クレアチニン、尿素窒素、尿酸、eGFR、尿中微量アルブミンを臨床項目について検討した。
結果と考察
糖尿病性腎症の新規バイオマーカー候補のうちfetuin-Aについて糖尿病性腎症患者の尿サンプルを用いて測定した。Human Fetuin-A ELISA (BioVender社)を用いて尿中の濃度を測定し、クレアチニン補正を行うことによって検討した。尿中fetuin-A排泄量、HbA1c、拡張期血圧、HDLコレステロール、LDLコレステロールを独立変数とし、eGFRを従属変数としてステップワイズ重回帰分析を施行した。すべての独立変数が投入されたモデルではいずれも有意差をもって独立した説明変数であることが示された。さらにステップワイズ重回帰分析によって尿中fetuin-A排泄量のみが有意な独立変数として採択された。
結論
尿中fetuin-A排泄量はACRに匹敵あるいは凌駕する新規尿中バイオマーカーの候補であると考えられる。

公開日・更新日

公開日
2015-04-23
更新日
-

文献情報

文献番号
201413003B
報告書区分
総合
研究課題名
糖尿病性腎症の糖鎖プロファイリングによる新規バイオマーカーの同定
課題番号
H24-難治等(腎)-一般-003
研究年度
平成26(2014)年度
研究代表者(所属機関)
和田　淳(国立大学法人岡山大学　大学院医歯薬学総合研究科)
研究分担者(所属機関)
  • 江口潤(国立大学法人岡山大学　岡山大学病院 )
  • 中司敦子(国立大学法人岡山大学　岡山大学病院 )
  • 勅使川原早苗(国立大学法人岡山大学　大学院医歯薬学総合研究科 )
  • 肥田和之(独立行政法人国立病院機構　岡山医療センター　糖尿病・代謝内科)
  • 清水一紀(心臓病センター榊原病院)
  • 宮下雄博(岡山赤十字病院　糖尿病センター)
  • 松岡孝(倉敷中央病院　糖尿病内科)
  • 安藤晋一郎(岡山市立市民病院　糖尿病科・糖尿病センター)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 疾病・障害対策研究分野 【補助金】 難治性疾患等克服研究（腎疾患対策研究）
研究開始年度
平成24(2012)年度
研究終了予定年度
平成26(2014)年度
研究者交替、所属機関変更
-

研究報告書（概要版）

研究目的
ヒトゲノムの配列が決定され、ポストゲノム研究が注目を集めるなか、糖尿病および糖尿病合併症の発症や進展に糖鎖異常が関与していることが報告されている。これらの糖鎖異常が明らかになれば、予後を推測するバイオマーカーとして有用であるのみならず、その糖鎖異常をターゲットとした治療戦略へと研究が展開する可能性がある。そこで糖尿病性腎症患者尿の糖鎖プロファイルを網羅的に解析した。
研究方法
健常人と糖尿病性腎症患者のセントリコンにより濃縮した尿サンプルをAgilentマルチプルアフィニティ除去システムで6種の主要蛋白を除去した後、透析膜を用いてPBSにバッファー交換した。健常人(n=12)、糖尿病性腎症正常アルブミン尿期(n=7)、微量アルブミン尿期(n=5)、顕性蛋白尿期(n=5)の尿サンプルを用いて、糖尿病性腎症の病期別にレクチンアレイ解析を行った。蛋白質濃度を測定し、Cy3標識したサンプルを濃度調製しGlycostationにより45種のレクチンへの結合性を測定した。腎症病期の進行にしたがって、シグナルが上昇していたのはα2-6結合シアル酸関連レクチン(SNA,SSA,TJA-1)であった。さらにSSAレクチンカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーにより精製したサンプルをLC-MS/MSによるショットガン解析を施行したところ28種類の糖蛋白質を同定した。これらの糖蛋白質のうち8種類がELISA法で測定が可能であり、そのうち測定感度以下とならず安定して測定できたのは、α1-microglobulin, orosomucoid, fetuin-Aであった。平成25年度に血液検査を施行しえた糖尿病患者737名について、年齢・BMI (body mass index)、外来血圧、HbA1c、随時血糖、血清コレステロール、トリグリセリド、HDLコレステロール、LDLコレステロール、血清クレアチニン、尿素窒素、尿酸、eGFR、尿中微量アルブミンを臨床項目について検討した。
結果と考察
糖尿病性腎症の新規バイオマーカー候補のうちfetuin-Aについて糖尿病性腎症患者の尿サンプルを用いて測定した。Human Fetuin-A ELISA (BioVender社)を用いて尿中の濃度を測定し、クレアチニン補正を行うことによって検討した。尿中fetuin-A排泄量、HbA1c、拡張期血圧、HDLコレステロール、LDLコレステロールを独立変数とし、eGFRを従属変数としてステップワイズ重回帰分析を施行した。すべての独立変数が投入されたモデルではいずれも有意差をもって独立した説明変数であることが示された。さらにステップワイズ重回帰分析によって尿中fetuin-A排泄量のみが有意な独立変数として採択された。
結論
尿中fetuin-A排泄量はACRに匹敵あるいは凌駕する新規尿中バイオマーカーの候補であると考えられる。今後は糖尿病患者コホート研究によって、糖尿病性腎症の進展や治療効果を判定できる有用な新規尿中バイオマーカーとしての尿中fetuin-A排泄量の有用性を確認する。

公開日・更新日

公開日
2015-04-23
更新日
-

行政効果報告

文献番号
201413003C

成果

専門的・学術的観点からの成果
糖尿病性腎症の病期別にレクチンアレイ解析を行った。蛋白質濃度を測定し、腎症病期の進行にしたがって、シグナルが上昇していたのはα2-6結合シアル酸関連レクチン(SNA,SSA,TJA-1)であった。さらにSSAレクチンカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィーにより精製したサンプルをLC-MS/MSによるショットガン解析を施行したところα1-microglobulin, orosomucoid, fetuin-Aを同定した。
臨床的観点からの成果
糖尿病性腎症の新規バイオマーカー候補のうちfetuin-Aについて糖尿病性腎症患者の尿サンプルを用いて測定した尿中fetuin-A排泄量、HbA1c、拡張期血圧、HDLコレステロール、LDLコレステロールを独立変数とし、eGFRを従属変数としてステップワイズ重回帰分析を施行した。ステップワイズ重回帰分析によって尿中fetuin-A排泄量のみが有意な独立変数として採択された。従って尿中fetuin-A排泄量はACRに匹敵あるいは凌駕する新規尿中バイオマーカーの候補であると考えられる。
ガイドライン等の開発
なし
その他行政的観点からの成果
糖尿病性腎症の進展を抑制する新たなバイオマーカーの同定によって末期腎不全患者の抑制につながる。
その他のインパクト
「糖鎖プロファイリングによる糖尿病合併症における新規バイオマーカーの同定(U-CARE Study: UMIN000011525)」におけるDiabetes Careに論文発表した（2018年）。新聞(山陽新聞2018年6月22日「糖尿病患者尿から腎機能悪化予測」)やニュース(Yahooヘルスニュース、m3.com、CareNet、糖尿病リソースガイドなど)で取り上げられた。

発表件数

原著論文（和文）
0件
原著論文（英文等）
23件
その他論文(和文)
0件
その他論文(英文等)
0件
学会発表(国内学会)
73件
学会発表(国際学会等)
6件
その他成果(特許の出願)
0件
その他成果(特許の取得)
0件
その他成果(施策への反映)
0件
その他成果(普及・啓発活動)
0件

特許

主な原著論文20編（論文に厚生労働科学研究費の補助を受けたことが明記された論文に限る）

論文に厚生労働科学研究費の補助を受けたことが明記された論文に限ります。

原著論文1
Inoue K, Wada J, Eguchi J, et al.
Urinary fetuin-A is a novel marker for diabetic neohropathy in type 2 diabetes identified by lectin microarray.
PLoS ONE , 8 (10) , e77118-  (2013)
doi: 10.1371/journal.pone.0077118.
原著論文2
Terami T, Wada J, Inoue K, et al.
Urinary angiotensinogen is a marker for tubular injuries in patients with type 2 diabetes.
Int J Nephrol Renovasc Dis , 6 , 233-240  (2013)
doi: 10.2147/IJNRD.S51829.
原著論文3
Mise K, Imamura M, Yamaguchi S, et al.
Identification of Novel Urinary Biomarkers for Predicting Renal Prognosis in Patients With Type 2 Diabetes by Glycan Profiling in a Multicenter Prospective Cohort Study: U-CARE Study 1.
Diabetes Care , 41 (8) , 1765-1775  (2018)
doi: 10.2337/dc18-0030.

公開日・更新日

公開日
2015-06-25
更新日
2019-06-10

収支報告書

文献番号
201413003Z
報告年月日

収入

(1)補助金交付額
23,400,000円
(2)補助金確定額
23,582,258円
差引額 [(1)-(2)]
-182,258円

支出

研究費 (内訳) 直接研究費 物品費 10,305,701円
人件費・謝金 1,177,844円
旅費 164,700円
その他 6,534,013円
間接経費 5,400,000円
合計 23,582,258円

備考

備考
利息319円、自己資金181939円

公開日・更新日

公開日
2015-04-23
更新日
-