文献情報
文献番号
201027065A
報告書区分
総括
研究課題名
神経・筋疾患のRNAiを用いた画期的治療法の開発
課題番号
H20-こころ・一般-019
研究年度
平成22(2010)年度
研究代表者(所属機関)
水澤 英洋(東京医科歯科大学大学院医歯学総合研究科 脳神経病態学分野)
研究分担者(所属機関)
- 横田 隆徳(東京医科歯科大学大学院医歯学総合研究科 脳神経病態学分野 )
- 木村 展之(独立行政法人医薬基盤研究所 霊長類医科学研究センター)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 疾病・障害対策研究分野 障害者対策総合研究
研究開始年度
平成20(2008)年度
研究終了予定年度
平成22(2010)年度
研究費
24,000,000円
研究者交替、所属機関変更
-
研究報告書(概要版)
研究目的
siRNAを用いて神経変性疾患、脳血管障害のsiRNA/shRNAによる遺伝子治療を行う。
研究方法
1)脳血管内皮細胞へのsiRNAデリバリー:脳内では脳血管内皮細胞にのみ発現するorganic anion transporter (OAT3) を標的遺伝子としたsiRNAを設計し、センス鎖の3’末端にcholesterolを共有結合させた (Chol-siOAT3)。Cy3標識したChol-siOAT3 (10mg/kg) をHDLに包含させてマウス尾静脈から6時間毎に3回投与し、24時間後に脳を摘出して微小血管分画を分離し、脳血管内皮細胞でOAT3遺伝子抑制効果を検証した。2) 骨格筋へのsiRNAデリバリー:新生児マウス腹腔内にSOD1を標的とした1x10E11vgのshRNA発現AAV9を投与して4週後、肝臓、心筋、骨格筋(大腿四頭筋、ハムストリング)の病理検索とSOD1のウエスタンブロット、RT-PCR,ノザンブロットを行いその効果を判定した。
結果と考察
1)内在性リポ蛋白をベクターとして生体内でshort-interfering RNA (siRNA) をin vivo デリバリーすることで脳血管内皮細胞における遺伝子発現を抑制する方法を開発し、脳血管内皮細胞が病態形成に関わるAlzheimer病、脳梗塞、多発性硬化症といった様々な疾患に対する新たな遺伝子治療として臨床応用しうる大きな可能性を明らかにした。2)遺伝性筋疾患の遺伝子治療のための基礎実験として、アデノ随伴ウイルスベクター(AAV)とshRNAを用いて骨格筋における標的遺伝子抑制を検討した結果、AAV9型ベクターで胎児マウスの腹腔内にshRNAを投与する方法は、明らかな副作用を生じることなく、骨格筋で標的遺伝子を抑制できた。このことは先天性筋疾患での遺伝子治療の大きな可能性を示した。
結論
1)内在性リポ蛋白を用いた脳血管内皮細胞への効果的なsiRNAのデリバリー法を初めて開発した。脳血管内皮細胞が病態形成に関わるAlzheimer病、脳梗塞、多発性硬化症といった様々な疾患に対して、新たな遺伝子治療として応用できることが期待される。2)shRNAをAAV9に組み込み新生児マウスの腹腔内投与することで、骨格筋で有意な標的遺伝子抑制に成功し、遺伝性筋疾患に対するshRNA遺伝子治療の可能性を示した。
公開日・更新日
公開日
2011-06-09
更新日
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