文献情報
文献番号
200932046A
報告書区分
総括
研究課題名
HIVが形成する高分子複合体の機能不全化とそれを応用したウイルス制御法の確立に関する研究
課題番号
H21-エイズ・若手-018
研究年度
平成21(2009)年度
研究代表者(所属機関)
鈴木 陽一(京都大学 ウイルス研究所)
研究分担者(所属機関)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 疾病・障害対策研究分野 エイズ対策研究
研究開始年度
平成21(2009)年度
研究終了予定年度
平成21(2009)年度
研究費
3,500,000円
研究者交替、所属機関変更
-
研究報告書(概要版)
研究目的
エイズはHIVの感染によって引き起こされる疾患であるが、HAART療法が可能となった現在でも、長期服用に伴う副作用や耐性ウイルスの出現が依然として大きな問題である。本研究ではHIV-1インテグレーションを実行する高分子複合体 (preintegration complex: PIC) に着目し、その機能を制御する細胞性因子を解析することによって、現存する化学療法と併用可能な新しいエイズ治療戦略の道筋を見出すことを目的とした。
研究方法
HIV-1 PICの調製はウイルス感染細胞の細胞質分画を抽出することによっておこなった。In vitro解析に用いる蛋白質は大腸菌で発現し、精製した。PICのインテグレーション活性はPICサンプルと標的DNA (ファージDNA)インキュベーションし、ウイルスDNAをサザンブロッティング法で検出することによって評価した。HIV-1インテグラーゼと細胞性蛋白質との相互作用は共免疫沈降法によって解析した。感染実験は複製可能なHIV-1ならびにHIVベクターを用いておこなった。
結果と考察
HIV-1 PICの機能に重要な細胞性構成因子としてDNA結合性蛋白質BAFが知られている。BAFはリン酸化されるとDNAへの結合能を失う。BAFのリン酸化修飾を触媒する細胞性キナーゼVRKをHIV-1 PICに添加したところ、in vitroにおけるPICのインテグレーション活性が阻害できることが明らかとなった。そしてその機能阻害にはPICからのBAFの解離を伴うことが示唆された。これは、細胞が本質的にもつインテグレーション制御分子の存在を示す初めての知見である。また、PICの重要な構成因子であるインテグラーゼ (IN) に結合する細胞性分子としてHuwe1を同定した。Huwe1ノックダウン細胞を用いた感染実験の結果より、Huwe1はインテグレーションまでの過程ではなく、感染性HIV-1粒子の形成を負に制御することがわかった。この結果はIN結合性因子のインテグレーション以外の過程における関与を示している。
結論
本研究ではHIV-1 PICに作用してインテグレーション反応を阻害する細胞性分子VRKと、IN結合性因子でありながら感染性ウイルス粒子の形成を負に制御する分子Huwe1を見出した。これらの結果はHIV感染症に対する新たな治療戦略を確立する上で極めて重要な情報をもたらすものと思われる。
公開日・更新日
公開日
2014-05-26
更新日
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