文献情報
文献番号
200837035A
報告書区分
総括
研究課題名
超高速・簡便な遺伝子組換え食品の新規確定検査法の開発
課題番号
H19-食品・若手-001
研究年度
平成20(2008)年度
研究代表者(所属機関)
張替 直輝(武庫川女子大学 薬学部)
研究分担者(所属機関)
- 齋藤 晋(住友ベークライト㈱S-バイオ開発部)
- 阿部 碧(住友ベークライト㈱S-バイオ開発部)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 健康安全確保総合研究分野 食品の安心・安全確保推進研究
研究開始年度
平成19(2007)年度
研究終了予定年度
平成20(2008)年度
研究費
4,000,000円
研究者交替、所属機関変更
-
研究報告書(概要版)
研究目的
本研究の目的は、遺伝子組換え食品(GMO)を短時間で簡便に検出できる新規検査法を開発することによって、GMOを使用した食品の正確な情報提供と多くの研究及び検査機関のGMO検査への参加を促進することである。本年度は、ワンポットPCR法とPCR-multiple primer extension (MPEX)法の開発を行った。
研究方法
ワンポットPCR法は、対象遺伝子を捕捉できるオリゴを固定したPCRチューブを使用することで、ハイブリダイゼーションによる対象遺伝子の抽出と定量PCRによる検出を一つのチューブで行う方法である。始めに大豆レクチン遺伝子(Le1)を実験対象として、チューブに固定するオリゴの配列や濃度、ハイブリダイゼーションの温度や時間などの基礎検討を行った。その至適条件で、定量性や食品マトリックスの影響を検討し、更に、遺伝子組換え(GM)大豆の検出に応用した。PCR-MPEX法は、DNAサンプルからMultiplex PCRで対象遺伝子を増幅し、そのPCR産物をDNAポリメラーゼの伸長反応にて検出するDNAマイクロアレー法である。今回、トウモロコシと大豆の各種特異的遺伝子、GMOの構造特異的配列(Event176、Mon810、Bt11、GA21、T25トウモロコシ、ラウンドアップレディー大豆)に対応する8種類のオリゴを固定したプレートを作製し、各GMOの検出を試みた。
結果と考察
最適化された条件下でワンポットPCR法は、1-100%の大豆溶解液からLe1を定量的に検出でき、大豆DNAを小麦やトウモロコシの溶解液に混和したサンプルからもLe1を検出することができた。更に、GM大豆の組換え遺伝子(RRS)を検出するチューブを作製したところ、1-100%のGM大豆溶解液から組換え遺伝子を定量的に検出することができた。PCR-MPEX法では、食品から抽出したDNAから対象の8種類の遺伝子をMultiplex PCRで増幅し、そのPCR産物をオリゴ固定プレートで発色反応にて検出した。この方法によって、GMトウモロコシ5品目とGM大豆1品目に対してGMO含有量1%まで判定することができた。
結論
ワンポットPCR法は40分程度の簡便な操作で食品溶解液から定量PCRを行うことができ、PCR-MPEX法は従来のマイクロアレーで1-18時間かかるハイブリダイゼーションの工程を3分間の伸長反応にすることができた。
公開日・更新日
公開日
2009-04-07
更新日
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