重症心不全患者の自己心筋幹細胞を用いた心筋・血管ハイブリッド組織シート移植治療の臨床研究開発

文献情報

文献番号

200806006A

報告書区分

総括

研究課題名

重症心不全患者の自己心筋幹細胞を用いた心筋・血管ハイブリッド組織シート移植治療の臨床研究開発

課題番号

H20-再生・一般-001

研究年度

平成20(2008)年度

研究代表者(所属機関)

浅原　孝之(財団法人先端医療振興財団　先端医療センター研究所血管再生研究グループ)

研究分担者(所属機関)

川本　篤彦(先端医療振興財団血管再生研究グループ・再生医療)
澤　芳樹(大阪大学医学系研究科外科学講座心臓血管外科学)
清水　達也(東京女子医科大学　先端生命医科学研究所・再生医療)
増田　治史(東海大学医学部再生医療科学)

研究区分

厚生労働科学研究費補助金厚生科学基盤研究分野再生医療実用化研究

研究開始年度

平成20(2008)年度

研究終了予定年度

平成22(2010)年度

研究費

48,000,000円

研究者交替、所属機関変更

研究報告書（概要版）

研究目的

重症心不全の患者から心筋幹細胞を分離し、臨床応用できるレベルの培養システムを開発する。

研究方法

１．ヒト心筋幹細胞の分離・培養技術の確立
開心術を受けた重症心不全患者から、術中に心臓組織を採取し、心筋幹細胞の分離・培養を試みた。
１）培養過程で必須のc-kit陽性細胞分離機器におけるカラム流量設定プログラムの最適化
２）培養細胞の品質確認のためのフローサイトメトリー（FACS）検査における最適な抗ヒトc-kit抗体の選定
３）培養に用いる仔牛血清のロットチェック
４）培養継代に伴う細胞増殖能、c-kit陽性率等の推移の確認
５）播種細胞密度、血清非働化の有無、継代のタイミングなどの培養条件の検討
２．ヒト心筋幹細胞の分化培養の開発
１）ヒト心筋幹細胞由来血管分化の検討
２）骨髄由来血管内皮前駆細胞の応用
３．マウス心筋幹細胞シートの治療効果判定

結果と考察

研究結果
１．ヒト心筋幹細胞の分離・培養技術の確立
カラム流量設定プログラムposseldsを採用することに決定した。
抗ヒトc-kit抗体A3C6E2を使用することに決定した。
臨床可能な最も優れたロットを選定した。
複数の患者心臓組織から心筋幹細胞の分離・培養、P6までは良好な増殖を示した。c-kit陽性率は、P4-P8で40-70％の高率を維持していた。
播種は310 cells/cm2以下、血清非働化なし、が適切培養条件であった。
２．ヒト心筋幹細胞の分化培養の開発
qPCRではKDR及びVE-cadherinの発現が確認された。骨髄由来血管内皮前駆細胞は、8GFからangiopoietin-1削除培養条件において、最も高い分化能を示した。
３．マウス心筋幹細胞シートの治療効果判定
マウス心筋幹細胞シート群では、移植3週目以降に左室拡張末期径、左室収縮末期径の拡大抑制及び左室短縮率の改善効果を示し、移植4週目で非移植群、脂肪間葉系細胞シート移植群に比して有意に血管数の増加を認めた。

考察
臨床応用レベルの心筋幹細胞の分離・培養手技を確立することが出来た。マウス心筋前駆細胞シート移植実験では、心臓のリモデリングの抑制及び心収縮力の改善が確認された。

結論

臨床応用可能は心筋幹細胞の分離・培養・品質管理のシステムを構築した。