文献情報
文献番号
200614084A
報告書区分
総括
研究課題名
網羅的遺伝子破壊による真菌症病原性発現の分子機構の解明と新規抗真菌剤開発への応用に関する研究
課題番号
H16-創薬-101
研究年度
平成18(2006)年度
研究代表者(所属機関)
梅山 隆(国立感染症研究所)
研究分担者(所属機関)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 厚生科学基盤研究分野 政策創薬総合研究
研究開始年度
平成16(2004)年度
研究終了予定年度
平成18(2006)年度
研究費
3,000,000円
研究者交替、所属機関変更
-
研究報告書(概要版)
研究目的
日和見感染症を初め、免疫不全による易感染症患者に認められる深在性真菌症は、患者の予後を大きく左右する深刻な感染症である。主要な医真菌であるカンジダやアスペルギルス等に対して、アゾール系薬剤とは異なる作用機作をもち、副作用の少ない新規抗真菌剤の開発が期待されている。本研究課題では、様々な分子生物学ツールを開発することによって病原真菌の基礎研究の進展を促進させる。それとともに、ゲノム情報を基にした網羅的な遺伝子破壊を行い、医真菌の病原因子を同定するとともに、創薬のために、同定した分子に対する特異的阻害剤を探索することを目的としている。
研究方法
C. albicansにおいて既に公開されているゲノムデータベースを基に、目的遺伝子について遺伝子破壊用カセットDNAをPCR法によって作製し、プロモーターをメチオニン・スレオニンの添加によって抑制可能なMET3プロモーターと置換した株を作製した。この株について、遺伝子抑制した際の増殖速度を調べ、遺伝子が生育に必須であるかどうかを確認した。また、二つの相同染色体から完全に遺伝子が欠失した株を取得した。さらに、プロテインキナーゼ以外の遺伝子破壊株について、遺伝子破壊による形態分化への影響を調べた。
結果と考察
プロテインキナーゼ93種類のうち、昨年度の結果から必須であると考えられる21の遺伝子についてMET3プロモーター置換株の作製を試みた。そのうち2種類について生育に必須であることが確認できた。それ以外の19種類のプロテインキナーゼについて、2つの相同染色体部位から完全に欠失した遺伝子破壊株の作製を再度試みた。最終的に、9種類の遺伝子について遺伝子破壊ができなかった。これらの遺伝子は生育に必須である可能性が高い。また、プロテインキナーゼ以外の遺伝子についても、遺伝子破壊株の解析や生化学的解析により抗真菌剤標的候補として考えることのできる遺伝子を数種類見出した。
結論
C. albicansでは困難とされている遺伝子破壊法について簡便に行える系を開発し、様々な遺伝子の遺伝子破壊株を作製した。C. albicansのゲノム上にコードされている全てのプロテインキナーゼ遺伝子について遺伝子破壊を行った。それにより、生育に必須である可能性が高い遺伝子を11種類見出した。また、プロテインキナーゼ以外の遺伝子についても、いくつか抗真菌剤標的候補を見出した。これらの遺伝子を今後詳細に解析することにより抗真菌剤の探索に貢献できると考えられる。
公開日・更新日
公開日
2007-04-02
更新日
-