文献情報
文献番号
200614062A
報告書区分
総括
研究課題名
ヒト細胞を供給源とした再生医療の早期実現化を目指す有効性、安全性の検証システムの確立
課題番号
H16-創薬-073
研究年度
平成18(2006)年度
研究代表者(所属機関)
梅澤 明弘(国立成育医療センター)
研究分担者(所属機関)
- 黒田 雅彦(東京医科大学 病理学)
- 岡本 英治(サミット・グライコリサーチ株式会社 製品開発部)
- 原 英二(徳島大学ゲノム機能研究センター タンパク情報分野)
- 小杉 好紀(株式会社ピリオドック 遺伝子工学)
- 石橋 卓也(東洋紡績株式会社 細胞工学)
- 黒丸 修(中外製薬株式会社富士御殿場研究所 創薬研究第一部)
- 澁谷 功(大塚製薬株式会社 細胞生物学)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 厚生科学基盤研究分野 政策創薬総合研究
研究開始年度
平成16(2004)年度
研究終了予定年度
平成18(2006)年度
研究費
27,600,000円
研究者交替、所属機関変更
-
研究報告書(概要版)
研究目的
ヒト細胞移植における有効性、安全性の検証システムを確立するために、細胞表面糖鎖解析に用いるレクチンの組換え体化並びに遺伝子改変化の研究を進める。また、ヒト正常細胞の分裂寿命を規定する分子メカニズムを明らかにし、正常な細胞機能を保持したまま分裂寿命の延長を可能にすることにより、細胞移植における安全性の検証システムを確立する。
研究方法
ヒト正常線維芽細胞における細胞老化の誘導に重要な働きをしているp16/RB-経路の作用機序を調べる。また、p16INK4a遺伝子の発現を化学発光により正確かつ高感度に検出出来るベクターを開発する。また、ヒト間葉系細胞を認識する組換え体レクチンの作成を行った。組換え体レクチンの糖結合活性は表面プラズモン共鳴法(SPR)、赤血球凝集活性及びフローサイトメトリー(FACS)で測定した。
結果と考察
ヒト正常線維芽細胞の細胞老化ではp16/RB-経路と増殖因子が協調してROSの産生を促進するために染色体分配並びに細胞質分裂の進行も抑制されていた。このため、細胞老化が誘導されると、その後でp16/RB-経路を遮断しても老化細胞は増殖を再開出来なかった。p16蛋白発現を化学発光によりモニター出来る細胞を用いることにより、DNA障害を誘発する刺激がp16蛋白の発現を誘導することを見出した。また、組換え体レクチンMAHを用いて、チップ上に固相化したSialyl-Tへの結合をSPRで測定したところ、結合活性が確認された。FACS測定においても、細胞表面への結合が確認された。
細胞老化が誘導されるとROSの産生が上昇するため細胞周期の複数のチェックポイントが活性化される。このことは老化細胞が安定に増殖停止を起こす原因となっていると考えられるが、遺伝子異常を引き起こす原因にもなっている。また、換え体レクチンの利用は、天然レクチンよりも再現性や結合性に優れた糖鎖解析を可能にする。
細胞老化が誘導されるとROSの産生が上昇するため細胞周期の複数のチェックポイントが活性化される。このことは老化細胞が安定に増殖停止を起こす原因となっていると考えられるが、遺伝子異常を引き起こす原因にもなっている。また、換え体レクチンの利用は、天然レクチンよりも再現性や結合性に優れた糖鎖解析を可能にする。
結論
p16蛋白の発現を化学発光によりモニター出来る細胞を用いることで、ヒト正常細胞の分裂寿命を規定する分子メカニズムを明らかにし、正常な細胞機能を保持したまま分裂寿命の延長を可能にする薬剤等のスクリーニングシステムを構築することができることになり、当初の目的が達成された。また、組換え体MAHは赤血球凝集法やSPR、FACSで糖結合活性が認められた。本技術によって作出されるリコンビトレクチンの利用により、天然レクチンを用いた従来法よりも再現性や結合性に優れた糖鎖解析が可能になることが期待される。
公開日・更新日
公開日
2007-04-17
更新日
-