ＡＡＶベクターを用いた筋ジストロフィーに対する遺伝子治療のｐｒｅ－ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｔｕｄｙ－筋ジス犬骨格筋で認められた免疫応答の克服

文献情報

文献番号

200500137A

報告書区分

総括

研究課題名

ＡＡＶベクターを用いた筋ジストロフィーに対する遺伝子治療のｐｒｅ－ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｔｕｄｙ－筋ジス犬骨格筋で認められた免疫応答の克服

課題番号

H16-遺伝子-003

研究年度

平成17(2005)年度

研究代表者(所属機関)

武田　伸一(国立精神・神経センター神経研究所遺伝子疾患治療研究部)

研究分担者(所属機関)

埜中　征哉(国立精神・神経センター武蔵病院)
鈴木　友子(国立精神・神経センター神経研究所遺伝子疾患治療研究部)
山元　弘(大阪大学大学院薬学研究科)

研究区分

厚生労働科学研究費補助金厚生科学基盤研究分野ヒトゲノム・再生医療等研究【ヒトゲノム遺伝子治療研究】

研究開始年度

平成16(2004)年度

研究終了予定年度

平成18(2006)年度

研究費

40,500,000円

研究者交替、所属機関変更

研究報告書（概要版）

研究目的

我々は，組換えアデノ随伴ウイルス（AAV）を用いて，短縮型でありながら，筋ジストロフィーの表現型を改善する能力を持つmicro-dystrophin遺伝子を用いた遺伝子治療についての研究を行ってきた。ジストロフィン欠損のDuchennne型筋ジストロフィーに対する臨床応用を図るために，ジストロフィン欠損の中型モデル動物である筋ジストロフィー犬を用いて組換えAAVの有効性を検証すると共に，カニクイザル骨格筋へ遺伝子を導入し，この方法論の安全性を検討する。

研究方法

1．正常対照犬の前・後肢筋に対し，LacZ遺伝子を組換えた血清Ⅱ型あるいはⅧ型の組換えAAVを導入し， 2，4，8週後に導入筋を採取し，組織学的に導入遺伝子の発現を検討する。さらに，組換えAAV導入の5日前より免疫抑制剤シクロスポリンとミコフェノレイト・モフェティルを毎日経口投与し，遺伝子発現及び細胞浸潤が改善されるかどうか検討する。

2．カニクイザルの左右の上腕筋及び前脛骨筋の計4箇所にLacZ遺伝子を組換えたⅡ型のAAVを直接注入し、1,2,4,週後に生検により解析する。

結果と考察

1.
（1）AAV8-CMVLacZを用いたイヌ骨格筋への導入では、AAV2-CMVLacZを用いた場合と比較して導入遺伝子の発現が高く、細胞浸潤についても減少傾向があった。なお、Ⅷ型AAVを用いたα-サルコグリカン欠損マウス骨格筋への導入では、遺伝子発現は導入部に留まらず、広い　範囲の骨格筋から検出された。
（2） cyclosporineにmycophenolate mofetilを併用して、Ⅱ型の組換えAAVをイヌ骨格筋に導入した場合には、免疫応答が軽減していた。
（3）筋ジストロフィー犬骨格筋に導入するために、Ⅱ型およびⅧ型AAVにヒト型及びイヌ型マイクロ・ジストロフィン遺伝子を組み換えた。

2．カニクイザル骨格筋への組換えAAVの導入では、導入量依存的に遺伝子発現が観察されたが、導入量が多い場合には、比較的早くから免疫応答が検出された。

結論

1．組換えAAVを用いたイヌ骨格筋への遺伝子導入では、免疫抑制剤の併用およびⅧ型AAVの利用により、遺伝子発現効率が改善し、免疫応答が軽減する傾向があった。

2．カニクイザル骨格筋への組換えAAVの導入では、遺伝子導入産物の発現と、イヌの場合より軽い程度の免疫応答が検出された。