文献情報
文献番号
200500127A
報告書区分
総括
研究課題名
Ｅ型肝炎ウイルスの献血者スクリーニング法の開発研究
課題番号
H17-特別-035
研究年度
平成17(2005)年度
研究代表者(所属機関)
池田 久實(北海道赤十字血液センター)
研究分担者(所属機関)
研究区分
厚生労働科学研究費補助金 行政政策研究分野 厚生労働科学特別研究
研究開始年度
平成17(2005)年度
研究終了予定年度
平成17(2005)年度
研究費
5,000,000円
研究者交替、所属機関変更
-
研究報告書（概要版）
研究目的
わが国では輸血を介したHEV感染が複数例確認され、輸血によるHEV感染リスクが問題視されている。輸血によるHEV感染防止対策を講じるには、献血者におけるHEV感染実態を明らかにすることが必要不可欠であり、これにはHEVスクリーニングに応用可能な検査システムが必要である。本研究は感度・特異性に優れ、かつ短時間に大量検体を処理可能なHEV-RNA検査システムの構築を目的とする。
研究方法
核酸抽出工程については、半自動核酸抽出装置QIAGEN BioRobot 9604の検体処理能力を評価した。核酸増幅・検出工程については、HEV-RNAを特異的かつ高感度に検出可能なリアルタイムRT-PCR法のプライマー・プローブを設計･合成し、その感度・特異性について評価した。以上の二つの工程を統合したHEV-RNA検査システムの性能を評価するために、北海道の献血者検体（総数約10万検体）を対象に、使用済みNATスクリーニング用検体を用いて、20本プールによるHEV NATを試験的に実施した。HEV NAT陽性が判明した検体については、Nested RT-PCR法で確認検査を行い、陽性が確認できた検体については、HEV抗体検査（IgM、IgG）、HEV-RNAの定量、分子系統樹解析を実施した。
結果と考察
核酸抽出に関しては、BioRobot 9604の検出感度を高めるために、専用キットの試薬構成を一部変更し、使用検体量も増量した。これに伴い新たに抽出プロトコールを作成した。また、核酸増幅・検出に関しては、ORF2/3の高度保存配列中にワンステップ・リアルタイム RT-PCR用のプライマー・プローブ配列を設定し、反応条件を決定した。このシステムの95％検出感度は約35 copies/mLと高感度で、他のウイルス(HBV、HCV、HIV-1)との交差反応は見られなかった。また96検体の検査所要時間は約6時間（用手時間は約2時間）で、1.5-2.0日掛かっていた従来法(AGPC法→Nested RT-PCR法→ゲル電気泳動法)に比べて大幅に短縮された。本システムを用いた献血者のHEV-RNA陽性頻度は約1/5000人と高く、19名の陽性者が確認された。このうち3名の陽性血は異なる3名の患者に輸血され、そのうち1名において感染が確認された。
結論
献血者のHEVスクリーニングに応用可能なHEV-RNA検査システムを構築し、これを用いて北海道内献血者のHEV-RNA陽性頻度調査を行ったところ、高いHEV陽性率が確認された。
公開日・更新日
公開日
2009-07-23
更新日
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